Un método de identificación de Salmonella spp. basado en la técnica PCR a tiempo real

Resumen

El objetivo de este estudio ha sido la validación de un método rápido para la identificación de Salmonella spp. Basado en la PCR a tiempo real con tecnología TaqMan. Para ello se optimizó un sistema de PCR a tiempo real basado en la amplificación de una región del gen inv A, y, a la vez, se validó éste mediante la repetición en dos laboratorios diferentes de un experimento en el cual se analizaban 50 cepas del género Salmonella y otras 30 pertenecientes a otros géneros. Para evaluar los resultados se tuvo en cuenta tanto la intensidad de fluorescencia normalizada (ARn) como el ciclo umbral (CT; ciclo en el que la intensidad de fluorescencia alcanza un umbral preestablecido). Los valores medios de ARn y CT para las cepas de Salmonella (2, 14 + 0, 87 Y 15, 30 + 0, 90, respectivamente) fueron estadísticamente diferentes de los valores obtenidos para el resto de cepas, pudiéndose establecer unos umbrales de ARn y CT basados en intervalos de confianza del 95% que permitieron la identificación correcta de cada una de las cepas testadas en cada experimento. La exactitud del ensayo fue, en términos de inclusividad y exclusividad, del 100%. Además, los resultados fueron similares cuando se empleó un pre-mix con todos los reactivos de PCR a excepción de las células bacterianas mantenido a -20ºC durante un mes. Por tanto, este método de PCR a tiempo real es una herramienta simple y rápida para la identificación rutinaria de Salmonella spp.