Caracterización del receptor nicotínico para la acetilcolina en la célula cromafin bovina

Resumen

El presente trabajo tiene por objetivo contribuir al esclarecimiento de la composición del receptor nicotínico neuronal (nAChR) presente en la membrana de la célula cromafín bovina (CCB), en la cual se ha identificado la presencia de ARNm que codifica para las subunidades alfa3, alfa5, alfa7 y beta4. Si bién no se conoce la composición exacta del receptor nativo, se piensa en la posible coexistencia de receptores alfa3beta4 y de receptores alfa7. Hemos empleado para ello registros electrofisiológicos mediante técnicas de fijación de voltaje en su configuración de célula entera, registros electrofisiológicos en ovocitos de Xenopus laevis, así como técnicas de inmunocitoquímica, inmunotransferencia y autorradiografía. Empleando técnicas de registro electrofisiológico, hemos observado que las corrientes iónicas de entrada a través del nAChR presentan cinética similar con todos los agonistas no selectivos utilizados, siendo ésta dependiente de la concentración de agonista utilizada. Acetilcolina (ACh), dimetilfenilpiperazinio (DMPP) y epibatidina mostraron una eficacia similar, siendo la amplitud de la corriente generada por estos agonistas el doble de la observada con nicotina y siendo su potencia relativa epibatidina mayor que DMPP mayor que nicotina mayor que ACh. Cuando se aplicó el agonista selectivo para los receptores alfa3beta4 citisina, se obtuvo una corriente de amplitud muy inferior a la obtenida con el agonista fisiológico ACh. De forma similar, los agonistas selectivos para el receptor alfa7, colina, 4-OH-GTS21 y AR-R17779 tampoco produjeron corrientes significativas o no produjeron ningún tipo de corriente en células cromafines bovinas mientras que en ovocitos de Xenopus laevis que expresaban el receptor alfa7 bovino sí que produjeron corrientes similares a las inducidas por ACh (100 micromolar). Además de los agonistas selectivos para los nAChRs alfa7 se utilizaron, como herramientas farmacológicas, dos moduladores alo