Estudio de la alteración de la alergenicidad del polen de pinus radiata producido por factores ambientalescontaminación y plagas fúngicas

Resumen

En los últimos años se ha constatado un aumento mundial de la prevalencia de enfermedades alérgicas, que es mayor en áreas urbanas respecto a las rurales. Además, se han descrito como alergénicos algunos pólenes que no lo eran. Es el caso del polen de Pinus radiata (PR), en el País Vasco. Se han invocado dos posibles causas para explicar estos fenómenos: la hipótesis de la higiene y el efecto de la contaminación. Dado que la contaminación es mayor en áreas urbanas, actualmente se estudia el efecto que ésta pudiera tener sobre los pólenes, bien facilitando su transporte dentro de la vía aérea o aumentando su potencia alergénica estimulando la producción de proteínas relacionadas con la patogénesis (PRP) que pueden actuar como alérgenos. Hasta el momento no se había estudiado en qué medida determinados factores ambientales, como la contaminación o la infección de un hongo (Sphaeropsis sapinea), podían afectar a la alergenicidad del polen de Pinus radiata. Objetivos: El objetivo principal del estudio es estudiar si factores estresantes para las plantas (contaminación e infección fúngica) pueden producir un aumento en la capacidad alergénica in vitro o in vivo del polen de pino. Como objetivos secundarios están: observar en los inmunoblotting si existe alguna proteína específica ¿de novo¿ y detectar mediante un estudio genético el patrón de bandas de RNAm diferenciales que pueden aparecer en el polen sometido a distintas situaciones de estrés. Material y métodos: Se recolectó polen de PR de 5 zonas: dos atmosféricamente limpias (S1 y S2); dos contaminadas (C1 y C2); una zona expuesta a contaminación y con árboles infectados por hongo (H). Se seleccionaron 35 pacientes alérgicos a polen de pino a los que se les realizaron pruebas cutáneas con los extractos S1, C1 y H y se les extrajo suero. Se estudió la potencia alergénica de las distintas muestras de polen mediante IgE-inmunoblotting, RAST-inhibición y se midió IgE específica utilizando uniCAP (Pharmacia, Suecia) comercial de PR y activando cápsulas de CAP con extractos de S1, C1 y H. Se realizó estudio genético en yemas de pinos de zonas S1 y C1 para conocer la expresión de ARNm mediante la técnica el RNA-cDNA-AFLP. Finalmente se midieron los niveles ambientales de los principales contaminantes en las distintas áreas estudiadas. Resultados: Los pacientes presentaban pruebas cutáneas de mayor tamaño y la actividad biológica estudiada mediante un ensayo de líneas paralelas era mayor con el extracto S1. No se encontraron diferencias en las cifras de IgE específica frente al polen de las distintas zonas (S1, C1 y H). La IgE específica era significativamente mayor con cualquier extracto problema (S1, C1 y H) que frente al extracto comercial de PR (p<0,05). No se encontraron diferencias entre los tres extractos en cuanto al patrón de bandas proteicas presentadas en SDS-PAGE e inmunoblotting, o en la densidad de las mismas. La potencia alergénica (medida por RAST inhibición) del polen de PR S1 y S2 era igual o superior a la potencia del polen C1, C2 y H. En el estudio genético se detectaron tres bandas de RNAm expresadas sólo en muestras de la zona C1, dos de las cuales mostraban alta homología con fragmentos expresados en /Pinus taeda/ en situaciones de estrés. Se encontraron cantidades mayores de todos los contaminantes en las zonas C1, C2 y H que en las zonas S1 y S2, a excepción del ozono, que era más abundante en las zonas consideradas limpias S1 y S2. Conclusiones y discusión: Dado que en la zona S1 el polen tenía mayor potencia alergénica, en futuros estudios habría que tener en cuenta al ozono como posible factor estresante de forma individual a la hora de valorar la alteración de la alergenicidad de los pólenes, puesto que es un agente con una conocida capacidad de producir daño vegetal.