Caracterización fenotípica y genotípica de "Listeria monocytogenes"

Resumen

Listeria monocytogenes es una bacteria Gram positiva, y patógena que causa infecciones tanto en animales como en humanos. Tiene una gran capacidad de adaptación a diferentes condiciones ambientales lo que la hace muy resistente y difícil de eliminar en las industrias alimentarias. La gravedad de la infección que produce hace que sea necesario un conocimiento profundo de las características de las cepas que aparecen en la cadena alimentaria y en los alimentos. Por tanto, el objetivo de este trabajo es la caracterización genotípica y fenotípica de L. monocytogenes ayudando a las empresas en su control. En esta tesis caracterizaremos cepas de L. monocytogenes aisladas de diferentes industrias alimentarias: 176 de una industria cárnica, 45 de una láctea y 26 de una de marisco tanto de producto final como de muestras ambientales. En la caracterización genotípica hemos empleado herramientas de biología molecular para la identificación y clasificación de genes por diferentes métodos de PCR: PCR a tiempo real, PCR convencional y electroforesis, Stress Survival Islet-1, Tn 6188 (radC, quacH) y bcrABC; También hemos tipificado mediante PFGE (Pulse-field gel electrophoresis), MLST (Multi-Locus sequence typing) y MvLST (Multi virulence locus sequence typing). También queremos comprobar la expresión del transcriptoma en situaciones de estrés. Para la caracterización fenotípica hicimos: curvas de crecimiento; test de resistencia / tolerancia a detergentes y desinfectantes y experimentos de estrés. Se complementarán con estudios de resistencia a antibióticos, cultivo celular y estudios in vitro en diferentes matrices alimentarias. Comprobando por PCR a tiempo real la identificación de las cepas como L. monocytogenes, posteriormente se clasificaron en función del serotipo. De las 176 colonias aisladas en la industria cárnica un 27,84 % se englobaron dentro del serogrupo 1/2a, 3a; 68,75 % en el serogrupo 1/2c, 3c; 1,14 % en 1/2b, 3b, 7 y 2,27 % en 4b, 4d, 4e. Los 45 aislados de la quesería se clasificaron como: 72,73 % en el serotipo 1/2a, 3a; 11,36 % en el serotipo 1/2b, 3b, 7; 11,36 % en 4b, 4d, 4e y 4,55 % en 1/2c, 3c. Uno de los aislados se englobó dentro un serotipo mixto. Los aislados procedentes de los productos de marisco se clasifica- ron: 92,31 % en el serotipo 1/2a, 3a y un 7,69 % en el serotipo 4b,4d,4e. A partir del PFGE, se obtuvieron 13 pulsotipos diferentes en la industria cárnica, 7 pulsotipos en la industria láctea y únicamente 2 en la de marisco. Con en el MLST se obtuvieron 8 perfiles diferentes en la industria cárnica, 7 en la industria láctea y 2 en la empresa de marisco. Las curvas de crecimiento muestran un comportamiento prácticamente similar en todas las cepas. En el test de resistencia / tolerancia a desinfectantes y detergentes, la mayoría de las cepas fueron tolerantes a los detergentes empleados y sensibles a elevadas concentraciones del desinfectante. Actualmente estamos realizando los experimentos de estrés oxidativo. El resto de experimentos citados pero de los que no se muestran resultados es debido a que son estudios planificados para ser desarrollados en un futuro, una vez optimizado los protocolos adecuados.